Project name
Desarrollo y validación de una prueba rápida molecular para la detección de SARS-CoV-2 empleado el método isotérmico RPA-LF (Recombinase Polymerase Amplification)
Acronym
045-2020-FONDECYT
Project code
045-2020-FONDECYT
Status
Finished
Start Date
20 May 2020
End Date
20 September 2020
OCDE knowledge area(s)
Biotecnología relacionada con la salud
Keyword(s)
Investigación científica Proyectos RPA-LF February SARS CoV Prueba rápida isotérmica
Resume
El gold estándar para la detección y cuantificación de ARN viral del SARS-CoV-2 se basa en la técnica RT-qPCR, método molecular altamente sensible y específico. Su ejecución requiere un tiempo aproximado de 2-3 horas, personal entrenado y de laboratorios de biología molecular bien implementados. Sin embargo, estos laboratorios no se encuentran ampliamente disponibles en el Perú, lo cual representa una importante limitación en las estrategias de contención y control contra el COVID-19. Universidad de Tohoku, Japón, se han diseñado y probado cebadores para el método isotérmico RPA. Además se ha realizado una validación analítica preliminar, determinando un límite de detección (LOD) y pruebas de reacción cruzada, para determinar la especificidad analítica. En UPCH, se volverá a estimar el LOD del SARS-CoV-2 RPA con diluciones seriadas de plásmido control positivo, equivalentes a 104, 103, 102, 10, y 1 copia/µL, y esto permitirá también evaluar la reproducibilidad de la prueba. La reacción isotérmica se realizará utilizando el kit RPA comercialmente disponible TwistAmp® (TwistDX, UK). Una vez verificada la reproducibilidad de la prueba, se realizará la validación clínica de la nueva prueba. Para ello, se contará con muestras de pacientes confirmados positivos del Hospital Nacional Cayetano Heredia y se estimará la sensibilidad. En este proyecto se propone desarrollar una alternativa al RT-qPCR por medio del uso de una prueba de amplificación isotérmica RPA-LF (por sus siglas en inglés: Recombinase Polymerase Amplification-Lateral Flow) (Li y col., 2018). Debido al uso de cebadores altamente sensibles y específicos y por medio de la adaptación de tiras de inmunocromatografía, se espera reducir el tiempo de detección del SARS-CoV-2 a 35 minutos. Además, la prueba tendrá la capacidad de ser desplegada en cualquier parte del territorio nacional sin la necesidad de contar con equipamiento costoso y laboratorio sofisticado, como en zonas rurales o de bajos recursos, o incluso en laboratorios móviles, lo que permitirá detección temprana y la respuesta efectiva de contención del COVID-19.
Geographical scope of study or application of the project
PERÚ
Sources of information: Directorio de Proyectos Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de Innovación Tecnológica